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本试剂盒专为快速而方便地进行PCR而设计，可用于普通PCR、RT-PCR、RAPD、PCR产物测序、RACE、DD-PCR和其它基于PCR的实验室工作。2×PCR Mastermix含有3.0mM的MgCl₂，0.2mM dNTP，0.1U/μL Taq DNA聚合酶和2×PCR Buffer。这种高度优化的混合物在大多数PCR条件下都表现良好，用户可在几分钟内配好PCR体系，您要做的仅仅是加入您的引物，模板DNA和适当量的无菌ddH2O。影响PCR反应的因素很多，有些情况下，即使本试剂盒的PCR Mastermix已高度优化，您可能也会遇到一些问题。如果您发现您的PCR产物不理想或者产物非常少，为了获得更好的结果，建议您使用提供的25mM MgCl₂调整您反应体系的MgCl₂浓度。

• 准备模板DNA和引物
  模板DNA的准备是PCR的关键步骤。一般的，PCR用的模板DNA应高度纯化，无蛋白、RNA和单核苷酸的污染。这些污染物能降低具有活性的Mg²⁺浓度，而Mg²⁺是Taq DNA聚合酶活性的重要因素。
  
  • 调整模板DNA浓度，基因组DNA为0.1～1μg/μL，质粒或噬菌粒则为0.01～0.1μg/μL。
    
  • 调整您的引物到0.1～1mM。
• 在一个PCR管中加入25μL 2×PCR Mastermix(推荐使用壁薄的管子)，然后加入1μL模板DNA，各引物1μL和22μL无菌ddH2O。
  
• 彻底混匀和短暂离心。
  
• 加入适量的矿物油(具有热盖功能的热循环仪则选作)。将您的管子放入热循环仪中并启动。

• 大多数时候，PCR失败是因为准备不当或初始材料不纯而引起的，比如dNTP，引物，模板DNA。有些情况下，模板DNA降解和引物被DNase污染是另外一种可能原因。请逐个检查您使用的所有溶液及初始材料。溶液配制计算不正确是导致PCR失败的常见原因。请检查您的计算是否正确。
  
• 重复PCR实验。PCR混合液中加有许多溶液，不小心错误加入一些溶液是另一个常导致PCR失败的原因，如果您在前面指出的问题中未能发现任何错误，请您重复一次您的PCR实验。
  
• 如果您重复一次PCR依然失败，请您更换实验中的所有溶液及初始材料，并再次重复。很多时候，即使您没发现原因，问题也能得到解决。
  
• 如果上述三个步骤都无法解决您的问题，您需要优化您的PCR。您应该考虑的主要因素有：Mg²⁺浓度。退火温度。如果您的引物长度在17～25个碱基之间，您可使用下列等式计算Tm值：
  Tm=4×(G+C) + 2×(A+T)。
  如果您的引物大于25个碱基，请使用下列等式：
  Tm=81.5+16.6(log [J+])+0.41(%G+C)-600/L-0.63 (%FA).
  J+= concentration of monocations.
  L=length of primers in bases.
  %G+C=引物中G+C含量。
  FA=formamide.
  一些添加剂有助于解决您的问题，比如such DMSO，甲酰胺等。